材料与方法

一、材料

AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。

通过后腿小腿肌肉注射免0疫小鼠（视频），氢氧化铝佐剂，每只小鼠注射100μl。

备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注射。

第21天按同样方式加强免0疫1针。

备注：每次佐剂和抗原现配现用。

第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。

腹0水制备产生单克0隆抗0体

0． 5 mL 弗 氏 完 全 佐 剂 腹 腔 注 射 4 只 雌性 BALB / c小鼠，同时培养杂交瘤细胞，弗氏完全 佐剂注射七天后，收集状态较好的杂交瘤细胞，洗涤后稀释注入小鼠腹腔，每只小鼠约 1 × 106 个，杂交瘤细胞注射 7-10 天后观察可见小鼠腹部肿大，则可以进行腹0水采集。

果蝇 mrj 的表达情况的检测

分别提取野0生型果蝇 R6 品系和 mrj 的 p 因子插入突变品系 15059 总蛋白，测定蛋白浓度后，上样量为 50 μg 进行 SDS-PAGE 电泳，使用制备的 MRJ 单克0隆抗0体进行 Western Blot 检测。

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