T细胞的ELISpot分析应用:
ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法,能够区分活化的T细胞亚群。例如,Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α,而Th2细胞产生其他细胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13。例如,这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。
在vaccine研究中,ELISpot是一种标准工具,用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用,包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。
T细胞的ELISpot分析应用:
B细胞ELISpot分析是分析Antibody免疫反应的有力工具,并且是仅有的少数能直接聚焦于Antibody分泌细胞(ASC)的分析方法之一。 这种J为灵敏的方法使研究人员能够识别样品中的ASC,并测量其总数以及那些对特定抗原分泌Antibody的数量。
例如,B细胞ELISpot可以揭示血液中长期记忆B细胞的数量,这是无法用其他方法评估的。B细胞ELISpot的主要应用包括检测B细胞对感染的反应和vaccine引发的反应。
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将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养,在有刺激的条件下,细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后,被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识,其后再与酶标记的亲和素作用,并加入底物使其呈色,有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有(或不含)刺激物中培养;
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被Antibody捕获;
3. 移出细胞,清洗板子,加入生物素标记的检测Antibody,形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构;
4. 为了观察膜上斑点的形成,加入酶标记的亲和素;
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;
6. 斑点计数(可用bioreader自动读板仪计数),数据处理,结果分析。
以上信息由专业从事BioReader 5000价格的世联博研于2024/5/9 7:20:12发布
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