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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，da光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，xaio可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
亮蓝
亮蓝，又名食用蓝色1号(日本)、食用蓝色2号，属水溶性非偶氮类着色剂。分子式C37H34N2Na2O9S3，相对分子质量792.86。亮蓝为食用蓝色色素,属于人工合成色素,是由邻磺酸与N--N- (3-磺基苄基)-经缩合、氧化而制得的。属于偶氮类化合物。可在食品、药品、化妆品等行业中作着色剂用。食品行业中适用于糕点、糖果、饮料等的着色。
中文名称
亮蓝
性质
带有金属光泽的红紫色颗粒或粉末
特点
无臭，水溶液呈蓝色
别名
酸性艳蓝G
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基本介绍
中文名：亮蓝
别名：酸性蓝 90；酸性艳蓝G；亮蓝；考马斯亮兰G250；考马斯亮蓝G250；Brilliant Blue鍳；亮蓝G；考马斯亮蓝G-250生物染色剂
英文名：Acid Blue 90
化学式：C47H48N3NaO7S2
CAS号：6104-58-1
MDL：MFCD00012141
摩尔质量：854.02
外观：带金属光泽的深紫至青铜色颗粒或粉末
纯度试验
（1）水不容物 小于0.20%。
（2）氯化物、硫酸盐 以总量计，小于4.0%。
（3）重金属 以Pb计，小于20ug/g。
（4 以As2O3计，小于4.0ug/g。
食用范围及使用量
我国《食品添加剂食用卫生标准》规定：可用于果汁饮料类、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩妆；染色樱桃罐头、冰淇淋、冰棍、雪糕、果冻、油炸豆腐、膨化食品、风味酸奶、青梅、虾片，使用量0.025g/kg;用于糖果包衣，用量为0.05g/kg;用于红绿丝为0.10g/kg；用于固体饮料，0.2g/kg;用于绿芥末膏，0.01g/kg;用于可可玉米片，0.015g/kg
亮蓝为有金属质感的浅紫色至古铜色颗粒物或粉末状，无臭。溶于于水，溶液呈亮蓝色；可溶精、丙二醇和凡士林。耐光性性、耐温性、耐碱性、耐盐性和耐微生物性非常好，耐酸性和耐氧化还原反应特点。弱酸性时呈青色，强碱时呈黄色，在烧开溶液中呈蓝紫色。亮蓝的饱和度极强，一般全是与别的服用添加剂相互配合应用，使用量小，在0.0005%~0.01%中间。装饰艺术蔬菜水果、可可制品、巧克力朱古力制品(包含可可脂朱古力及制品）及其糖块（05.01.01可可制品、05.04装饰设计糖块、顶饰和甜汁以外）、点心上彩装。客户在应用本产品前要认真阅读GB2760《食用添加剂应用质量标准》，每个纯色种类的应用范畴和使用量会大不一样。
以上信息由专业从事洁厕灵亮蓝生产厂家的富舜新材料于2024/5/15 6:20:03发布
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