原位杂交(In situ hybridazation)
固定
收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后换成,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的PBST溶液,放置5分钟
3) 置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟
5) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,室温。
4) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
植物原位杂交的应用包括:
研究基因表达:通过观察荧光信号的位置和数量,可以确定目标基因在植物组织中的表达模式和位置。
染色体定位:将目标基因与染色体中的特定位置进行比较,可以确定目标基因在染色体中的位置和分布。
基因:通过原位杂交技术,可以确定目标基因的序列和位置,为基因提供重要的参考信息。
检测物种或品种特异性:通过原位杂交技术可以检测出不同物种或品种之间基因表达的差异,从而为物种或品种特异性研究提供依据。
遗传育种:通过原位杂交技术可以检测出不同品种之间基因表达的差异,从而为遗传育种提供重要的参考信息。
以上信息由专业从事原位杂交服务的贝科新肽于2024/4/29 6:32:01发布
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